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CORD-19:07e34ead4449affe21cf5cf80737f6ad67d59009 JSONTXT 9 Projects

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Id Subject Object Predicate Lexical cue
T1 0-201 Sentence denotes Etablierung eines Fischvirus empfanglichen Zellstammes aus Hypophysen des Karpfens (Cyprinus carpio L.) Establishment of a Fish Virus Susceptible Cell Strain from Pituitary of Carp (Cyprinus carpio L.)
T2 203-211 Sentence denotes Abstract
T3 212-301 Sentence denotes A new continous cell strain (CaPi) was established from normal pitu itary tissue of carp,
T4 302-571 Sentence denotes Cells of a frac tio na ted dispersion (0.25% tryp sin-PBS, 10 "C) of pit uitar ies for med mon olayer (fibroblast-and epithelial-lik e-cells) at 25°C using Eagle's mini mal essentia l medium (M EM) supp lemented with 10% fetal calf serum and non essential amino acids .
T5 572-740 Sentence denotes The continous cell strai n, designated CaPi, was obtained by an enzymati cal selecti on of epitheloid cells fr om the monolayer of the primary pit uitary cell cult ure.
T6 741-815 Sentence denotes T his culture has been subculter ed 70 times over a period of 24 mon ths .
T7 816-962 Sentence denotes CaPi-c ells multiply over a temperature range of 15-35°C wi th an optimum growth temperature of 30°C at a seedi ng density of 1.7 x 10· cells /m\.
T8 963-1067 Sentence denotes Chromosome ana lysis ind icate s th e cells are het eroploid and show modal numb ers of 47 chromoso mes.
T9 1068-1173 Sentence denotes T he CaPi cell line is susceptible to fishviru ses (VHSV, PFR, SVCV) producing cyto pathic effects (CPE).
T10 1174-1236 Sentence denotes H owever, IPNV repl icate s witho ut visible cell alterations.
T11 1238-1693 Sentence denotes Es wu rde ein permanenter Z ellstamm (CaPi) aus normalen Hypophysen des Karpfens (Cyprinu s carpio L.) etablierr , Die aus Karpfenh ypoph ysen-Gewe be fra ktioniert frei gesetzten (0.25% T rypsin-PBS-Losung, 10 "C) Zellen bildeten bei 25°C un ter Verwendung von Eagle's M inimal Essent ial Medium (MEM), ange reichert mit 10% fo ta lern Kalberser um und nichtessentiellen Aminosauren eine n Mo nolayer mit fibro blasten-und epithe lahn lichen Z ellen aus.
T12 1694-1830 Sentence denotes Von dieser Primarkulrur ist der Cal'i-Zellsramrn unter selektiver enzymatischer Abl osung der epithelahnlichen Zellen etab liert worden.
T13 1831-1906 Sentence denotes Der Zell-Starnm wurde inn erh alb 24 Monaren bisher 70 mal subkul tivie rt.
T14 1907-1974 Sentence denotes Die CaPi-Zellen verme hre n sich bei Temperaturen zwischen 15-35°C.
T15 1975-2088 Sentence denotes Die op timale Zellvermehru ng erfolgt bei 30°C unte r Verwendung einer Zelleinsaatm enge von 1,7 x 10' Zellen/ml.
T16 2089-2154 Sentence denotes Der Modalwert der stetigen Verteilung der Chromosomen betragt 47.
T17 2155-2311 Sentence denotes Die CaPi-Zeilen vermehren Fischviren mit ausgepragrern zytopathischen Effekt (VHSV, PFR, SVCV), das IPNV repliziert sich ohne wahrnehmbare Zellalterationen.
T18 2312-2422 Sentence denotes Fischzellkulturen gewinnen fur physiologische, toxikologische und virologische Studien zunehmend an Bedeutung.
T19 2423-2691 Sentence denotes Unter den in der Literatur zitierten 61 permanenten Fischzellkulturen befinden sich nur 2 vom Karpfen (Cyprinus carpio) abstammende Zell-Linien: a) der aus Flossengewebe hergestellte KGCP-l-Zellstamm, b) der aus neoplastischem Hautgewebe gewonnene EPC-Zellstamm (18) .
T20 2692-2966 Sentence denotes Wahrend uber die Virusernpfanglichkeit der KGCP-l-Zellen nichts bekannt ist und diese Zell-Linie in der Fischvirologie nicht verwendet wird, finden die EPC-Zellen (6) in vielen Laboratorien sowohl in der Routinediagnostik wie auch in der Forschung haufig Verwendung (3, 4) .
T21 2967-3164 Sentence denotes Neuere Untersuchungen haben aber gezeigt, daf die in verschiedenen amerikanischen und europaischen Laboratorien gehaltenen EPC-Zellen persistent mit einem Coronavirus infiziert sind (Hertrik, pers.
T22 3165-3269 Sentence denotes Mitt.), was den weiteren Einsatz dieser Zell-Linie fur virologische Zwecke problematisch machen diirfre.
T23 3270-3593 Sentence denotes Fur die Erforschung und Diagnostik karpfcnpathogener Viren ist aber das Vorliegen einer vom Wirtsfisch abstammenden Zell-Linie von Bedeutung, zumal beim Karpfen Viren existieren (z.B, das mit den "Karpfenpocken" assoziierte Herpesvirus), die wegen der mutmaRlichen Wirtsspezifitat bisher noch nicht isoliert werden konnten.
T24 3594-3818 Sentence denotes In der vorliegenden Arbeit wurde versucht, aus Karpfenhypophysenzellen, die prirnar der Untersuchung der Gonadotropinfreisetzung in vitro dienten (16) , einen fur die Fischvirologie geeigneten Zellstamm (CaPi) zu etablieren.
T25 3819-4012 Sentence denotes Fische Als Zellspender dienten dreisommerige Karpfen (Cyprinus carpio L.), die freundlicherweise vom Fischgesundheitsdienst Bayern e.V. in Grub bei Miinchen zur Verfiigung gestellt worden sind.
T26 4013-4131 Sentence denotes Die Fische befanden sich in einem guten gesundheitlichen Zustand und hatten ein Durchschnittsgewicht von 1500 ± 500 g.
T27 4132-4220 Sentence denotes Die Fische wurden mit 1,1,1-Trichlor-2-methyl-2-propanol (Merck) (0,9 gil H20 ) betaubt.
T28 4221-4304 Sentence denotes Das Ausbluten der Tiere erfolgte durch Abschneiden des ventralen Endbereichs des 4.
T29 4305-4318 Sentence denotes Kiemenbogens.
T30 4319-4519 Sentence denotes Nach der Hautdesinfektion mit 70% Isopropanol ist durch aseptische Trepanierung das Gehirn freigeIegt worden, das nach Durchschneiden der Medula oblongata und der kranialen Nerven entfernt worden ist.
T31 4520-4710 Sentence denotes Die freiliegende Hypophyse wurde mit einem Scharfloffel entnommen und sofort in Minimal Essential Medium (MEM) + Antibiotika (60,ug/ml Gentamicin und 2,5 ,ug/ml Amphotericin B) iibergefuhrt.
T32 4711-4869 Sentence denotes Der Aufschluf der Hypophysen (16) erfolgte iiber 5 Std. mit 0,25% Trypsin in PBS (Phosphate buffered saline), (pH 7,2) mit Hilfe eines Magnetriihrers bei 4°C.
T33 4870-5191 Sentence denotes Einzelne stiindlich abgenommene Fraktionen wurden bei 300 g fiir 10 Min. (4 -C) zentrifugiert und das Zellsediment ist mit Anzu ehtsmedium (Eagle's MEM, angereichert mit 10% foralern Kalberserum und nichtessenti ellen Am ino sauren und Antibiotika -Gentamicin 60 pg /ml und Amphotericin B 2,5 pg /ml ) aufgenommen worden.
T34 5192-5322 Sentence denotes Naeh Bestimmung der Anzahllebenden Zellen (0,5% Trypanbl aulosung, Neubauer-Zahlkammer) wurden die Fraktionen bei 10°C aufbewahrt.
T35 5323-5475 Sentence denotes Anschliefsend sind die gepoo lten Zellsuspensionen dureh Zugabe eines entsprechenden Volumens Anzuehtsmedium auf 6 X 10 5 Zellen /ml eingestellt worden.
T36 5476-5590 Sentence denotes Die Anzu eht der Zellen erfolgte in Plastikflaschen mit ein er Wachstumsfliiehe von 25 em' (Falcon 3013) bei 25°C.
T37 5591-5730 Sentence denotes Innerhalb 7 Tagen waren die Zellen zu einem Monolayer mit gemischten Z ellty p (fibro blastcnahnliche und epitheloide Zellen) ausgewachsen.
T38 5731-5968 Sentence denotes Durch selek ti ve enzymatisehe Ablosung von epirhelahnl ichen Zellen einer konfluenten prirnaren Karp fenh ypophysen zell kultur (bcstehend aus ep irhel-und fibrobl astenahnlichen Zellen) wurde ein permanenter Zellstamm (CaPi ) gewonnen.
T39 5969-6079 Sentence denotes Die ep irhelartigen Zellen losten sieh innerhalb von 5 Min. , die fibroblasrenahnlichen d agegen erst naeh ca.
T40 6080-6295 Sentence denotes 10 Min. ab oDie selektiv abgenommenen, epirhelahnlichen Zellen (CaP i) wurden in PBS aufgenommen, sedimentiert (400 g, 4°C, 10 Min. ) und mit Anzuehtsmedium (5 ml ) neu in Plastik-f1aschen (25 em' -Falcon) eingesar,
T41 6296-6443 Sentence denotes Die Feststellung der optim alen Zelleinsaatmenge fur CaP i-Ze1len erfolgte unter Einsaat von 1 X 10 5 , 2 X 10 5 , 6 X 10 5 und 1 x 10· Zellen /ml.
T42 6444-6610 Sentence denotes Die Z ellvermehrung bei 30°C wurde iiber einen Ze itraum von 7 Tagen aile 24 Std. sowie 11 und 14 Tage na ch der Einsaat ermittelt (Zellzahl aus jeweil s 3 Kulturen).
T43 6611-6701 Sentence denotes CaPi-Ze!len (6 x 10 5 Zell en /ml) wurden bei 5, 10, 15,20, 25, 30, 35 und 37°C inkubiert.
T44 6702-6796 Sentence denotes Irn 24stiindigen Rh ythmus sind die Zell vermehrungsraten von je 3 Kulturen untersucht worden.
T45 6797-6858 Sentence denotes Es wurde di e Methode von Aubert (5) und Paul (14) verwendet.
T46 6859-6955 Sentence denotes Nach Umwandlung der Forme! (N = N oe k t ) crhalt man die Gleichung : log N = log No + kt log 2.
T47 6956-7016 Sentence denotes Die Chro mosomenana lyse der Karpfenhypophysenzellkultur (1.
T48 7017-7048 Sentence denotes Subkultur) und CaPi-Zellen (53.
T49 7049-7097 Sentence denotes Subkultur) wurde naeh der Method e von Scbroy U.
T50 7098-7108 Sentence denotes T odd (17)
T51 7110-7270 Sentence denotes Die Haufigkeitsverte ilung der Chromosomen normaler Karpfenhypophysenzellen in Kultur zeigten im Vergleich mit den CaPi-Zellen deutliche Unterschiede (Abb, 4) .
T52 7271-7358 Sentence denotes Der Modalwert der stet igen Verteilung der Chromosomen der Karpfenhypoph ysenzellen (3.
T53 7359-7402 Sentence denotes Subkultur) ist 91, der der CaPi-Zellen (53.
T54 7403-7417 Sentence denotes Subkultur) 47.
T55 7418-7508 Sentence denotes Die Rhabd oviren (VHS, PFR, SVCV) vermehrten sich in den CaPi-Zellen von der 1. bis zur 5.
T56 7509-7593 Sentence denotes Passage mit Ausbildung zytopathischer Effekte (CPE) und char akteristischer Plaques.
T57 7594-7716 Sentence denotes Der SVCV-Titer blieb wahrend 5 Passagen in CaPi-Zellen weitgehend kon stant (6, (2) (3) (4) (5) (6) 8 log KlD 50 /0,1 ml).
T58 7717-7754 Sentence denotes Das PFR zeigte zwischen der 1. und 2.
T59 7755-7893 Sentence denotes Passage eine T irererhohung von 6,5 auf 8,2 log KID 50 /0,1 rnl, dan ach erfolgte cine Stabili sierung der Ti ter auf den Ausgangswert (1.
T60 7894-7903 Sentence denotes Passage).
T61 7904-8025 Sentence denotes Der Infekt ion stiter des VHS blieb wa hrend der 5 Passagen eben falls weitgehend kon stant (7,2-7,8 log KID 50 /O,1 ml).
T62 8026-8075 Sentence denotes Das lPN-Virus vermehrt e sich in CaPi-Ze llen (1.
T63 8076-8161 Sentence denotes Passage) mit bis zu 80% ausgebildetem CPE und einem Titer von 7,2 log KlD 50 /0,1 m!.
T64 8162-8171 Sentence denotes Ab der 2.
T65 8172-8300 Sentence denotes Passage betrug die CPE-Ausbildung nur 20% und der Viru stiter sank auf 4,8 log KI0 50 /O,1 ml (Titration in hornologen Zellen ).
T66 8301-8310 Sentence denotes Ab der 3.
T67 8311-8436 Sentence denotes Passage blieb der CPE aus, und es konnte bei einer Ti tration mit homologen Z cllen kein Virusgehalt mehr errnittelt werden .
T68 8437-8627 Sentence denotes Eine Kontroll-T itr ation in PG-Z ellen erga b dagegen einen Virus-Ti ter von 7,2 log KI0 50 /O,1 ml, was auf eine nichtzytolytische Virusreplikat ion in Ca Pi-Ze lIen schlie-Ben lafSt (Tab.
T69 8628-8631 Sentence denotes 1).
T70 8632-8760 Sentence denotes In der vorliegenden Arbe it wird die Etablieru ng eines permanenten Zellstammes (CaPi-Zellen) aus Karpfenhypophysen beschrieben.
T71 8761-8857 Sentence denotes Aus der Literatu r sind bis jetzt nur zwei vom Fisch abstammende Hypophysenzellkulruren bekannt:
T72 8858-9033 Sentence denotes Eine von Buntb arschen (15) zum Zwecke morph ologischer Untersuchungen erabliert und eine von Regenbogenforc1len (11) fur morphologische und virolo gische Studien hergesrellt.
T73 9034-9216 Sentence denotes Der Z ellstamm (CaPi) unterscheidet sich hin sichtl ich der Morpho logic, Chro mosomena nza hl sow ie irn Wac hstu msverha lten von den urspr iinglichen prirnaren H ypoph ysenzellen.
T74 9217-9347 Sentence denotes Wii-hrend die prirnar cn Karp fenhypoph ysenzellen aus verschiedenen Ze lltypen bestanden , sind die CaPi-Z ellen rein epitheloid.
T75 9348-9401 Sentence denotes Weiterhin wurde bei den Karp fenh ypophyscnzellcn (3.
T76 9402-9548 Sentence denotes Subkultur) ein Mo da lwer t von 91, bei den CaPi-Ze llen (53 Subkultur) von 47 hin sichtlich der stetigen Vertei lung der Chro mosomen errnitrelt.
T77 9549-9735 Sentence denotes Die Ursache der abweichenden Chromoso mena nzahlen des Ausgangsmaterials (2n = 104) (7) und der in vit ro kulti viert en Ze llen ko nnte in der vorliegenden Arbeit nicht geklart werden .
T78 9736-9857 Sentence denotes Bei fast allen untersuchten Z ell-Linien wurde cine vom Ausgangsrnat crial abw eichcnde Chrornosornena nza hl errnittelt.
T79 9858-10054 Sentence denotes In der Regel vcrfiigen Zell-Lini en uber triploide bis tet raploid e Chro moso mena nzahlen, allerdings wurden bei einigen Zcll-Linien auch subdiploide Kar yot ypen festgestellt (zitiert nach 12).
T80 10055-10237 Sentence denotes Im Gegensatz zu den primaren Karp fenh ypophysenzellen zeigen die CaPi-Z ellen keine Gona dotropinfreisetzung in vitro (16) und weisen stellenweise ein rnehrschichtiges Wachstum auf.
T81 10238-10315 Sentence denotes Augerd em wurde festgestelIt, dag cine dichte Karpfenhypophysenzellkultur ca.
T82 10316-10385 Sentence denotes 43% weniger Zellen enthalt als eine dichtgewachsene CaPi-Zellkultur .
T83 10386-10540 Sentence denotes Sowohl fur die Vermehrung prirn ar er Karpfenhypophyscnzellcn als auch fur die der CaPi-Z ellen wurde die gleiche optimale Temperatur von 30°C errnittelt.
T84 10541-10668 Sentence denotes Die CaPi-Z ellen liefsen sich bei 15°C ohne Mediumwechsel iiber 2 M on at e in einem guten subku ltivierba ren Zu stand halten,
T85 10669-10815 Sentence denotes Mit Ausnahm e des lP N-Virus vermehrten sich die unt ersuchten Viren (VHS, PFR, SVCV) in den CaPi-Zellen unt er Ausbildung zytopathischer Effekte.
T86 10816-10938 Sentence denotes Mi t 100 infekt iosen Einheiten des IPN-Virus infizierte Z ellen zeigren einen bis zu 80% ausgebildeten CPE, der in der 2.
T87 10939-11029 Sentence denotes Passage nur noch 20% betru g und eine T iterabn ahme von 7,2 au f 4, 8 log KID so aufwies.
T88 11030-11040 Sentence denotes Bei der 3.
T89 11041-11161 Sentence denotes Passage wurde kein CPE mehr beobachtet und es konnre auch mit den hom ologen Zellen kein Virus mehr nachgewiesen werden.
T90 11162-11257 Sentence denotes Unter Verwendung von PG-Z ellen (1) wurde dagegen dennoch eine IPN-Virusrcplik ation bei der 3.
T91 11258-11285 Sentence denotes CaPi-Passage festgestellt .
T92 11286-11604 Sentence denotes Ahnliche Beobachtungen haben Nicholson et al. (13) bei Infektionsstudi en von 4 Fischzell-Linien mit verschiedenen IPNV-Isolaten gernacht, Aus der Literatur ist weiterhin bekannt, daB FH M-Zellen, die aufgrun d ihrer Morphologic den CaPi-Z elien ahnlich sind, nichtzytolytische IPNV-Replikationen aufweisen (9, 2, 3) .
T93 11605-11766 Sentence denotes Wie die vorliegenden Unter suchungen zeigen, eignen sich die CaPi-Z elien fur die in vitro-Verrnehrung von Fischviren; insbeso ndere fur da s VHSV, PFR und SVCV.
T94 11767-12027 Sentence denotes Die vergleichend in der Rou tin ediagnostik eingesetzten FHM (8)-und EPC (6)-Zellen wa ren den CaPi-Z elien hinsichtlich der Sensitivitar und der Virusa usbeute nicht iiberlegen, Fur die Isolierung karpf cnp athogener Viren mit hoher Wirtszellspezifitiit (z.B.
T95 12028-12102 Sentence denotes Herpesviren) konnten die CaPi-Zelien ein geeignet es Substr at darstellen.